品种和年龄对公猪精液的影响初步研究分为五部分:①实验的意义;②所需材料;③研究方法;④研究结果;⑤讨论与结论,本文主要讲述第三部分:研究品种和年龄对公猪精液的影响的具体操作方法。
用移液器取2μl精液与50μl37°C生理盐水混合后滴于预热的载玻片上,加盖20x20mm的盖玻片,在200倍光学显微镜视野下,分别对2个视野中精子的运动状态录像,3位实验人员观看录像,并采用0~10的10级评分标准打分,直线前进运动的精子为100%者评为10级;90%者为9级,以此类推,计算平均值。
采用伊红-苯胺黑活体染色技术染色,在400倍光学显微镜视野下,计数300个精子,计算出其中所含的活精子数所占比例。死活精子判定标准:死精子着红色,活精子不着色,呈灰白色。
采用龙胆紫活体染色技术染色,在光学显微镜400倍视野下,计数300个精子,进行形态结构异常精子统计。
采用精子密度仪进行测定,通过精子密度仪的透光系数计算精子的密度,计算公式:精子密度(106/ml)=透光系数×1121。
总精子数(109)=精子密度×射精量
分别以使用时间6个月、22个月为界限(公猪的平均开采月龄按照8月龄开始计算)将所有的样本分成三个年龄组:青年组(月龄小于14)、壮年组(月龄为14至 0)和老年组(月龄大于30)。用SAS9.1软件的GLM程序对537个样本数据分别对品种年龄进行双因素方差分析。
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研究品种和年龄对公猪精液的影响的操作方法第一步:计算平均值第二步:精子活率(VIA)第三步:精子畸形率(ABN