问题补充:
粮食问题一直困扰着人类。为扩大可耕地面积,增加粮食产量,沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题:
图1转基因操作流程图
表2几种限制酶识别序列及切割位点表
(1)如果要将耐盐碱基因和质粒重组,必须对基因进行修饰和改造:在基因两侧的A和B位置分别加入限制酶识别序列,这样才有利于目的基因和质粒定向连接。
(2)过程②采用PCR技术扩增目的基因时,在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质,若共用了引物Ⅱ31个,则目的基因扩增了代。
(3)若用EcoRⅠ和PstⅠ两种限制酶同时切割载体质粒,则能形成种不同长度的DNA片段,共有个游离的磷酸基团。
(4)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌,而是先将其导入大肠杆菌,目的是。
(5)在步骤⑤⑥过程中都需用处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达,通常从分子水平进行检测的方法是用法。(1)EcoRⅠ、SmaⅠ(2)5
(3)2 4(4)获取大量重组质粒(让目的基因扩增)
(5)Ca2+抗原—抗体杂交
答案:
(答案→)(1)EcoRⅠ、SmaⅠ(2)5
(3)2 4(4)获取大量重组质粒(让目的基因扩增)
(5)Ca2+抗原—抗体杂交
解析:
试题分析:
(1)要想让目的基因和质粒定向连接,目的基因两端的切点最好不同,分析图1中质粒的酶切位点,题干中已经使用了限制酶EcoRⅠ,如果再用限制酶PstⅠ进行切割,切下的质粒片段比较长,可能会影响质粒的功能,因此最好使用SmaⅠ,同理对目的基因两侧用EcoRⅠ、SmaⅠ限制酶进行切割,可以保证定向连接,比较重组DNA分子和质粒可知,A端用限制酶EcoRⅠ,B端使用限制酶SmaⅠ。
(2)根据PCR技术扩增的过程可以推知,消耗引物Ⅱ31个,说明共生成了32个DNA分子,32=25,因此一共扩增了5代。
(3)分析图1可知,若用EcoRⅠ和PstⅠ同时切割载体质粒,则能形成2种DNA片段,由于每个DNA链的一端有1个游离的磷酸基团,故一个DNA片段有2个游离的磷酸基团,共4个游离的磷酸基团。
(4)将基因表达载体导入大肠杆菌便于培养,让目的基因大量扩增。
(5)将目的基因导入微生物细胞中都要用到Ca2+处理法,使微生物细胞成为感受态细胞;为了确认目的基因是否成功表达,从分子水平上进行检测,即检测表达产物蛋白质,要用到抗原-抗体杂交法。
考点:本题考查基因工程的有关知识,意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力;能从课外材料中获取相关的生物学信息,并能运用这些信息,结合所学知识解决相关的生物学问题。
粮食问题一直困扰着人类。为扩大可耕地面积 增加粮食产量 沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题:图1转基因操作流程图